A Sociedade Brasileira de Patologia Clínica/Medicina Laboratorial divulgou em fevereiro um documento oficial com seu posicionamento sobre o diagnóstico laboratorial do Zika vírus, e que também responde a algumas perguntas básicas e apresenta dois fluxogramas com algoritmos de exames laboratoriais baseados em documentos do CDC, EUA.

Diagnóstico de infecção pelo Zika vírus

Atualmente o diagnóstico pode ser feito através da detecção direta do vírus, por métodos moleculares, e também indiretamente, pela detecção de anticorpos circulantes.

Detecção de anticorpos – pode ser feita por ELISA, imunofluorescência indireta ou imunocromatografia.

Anticorpos IgM são detectáveis após 4 dias de infecção indo de 2 a 12 semanas, na fase de convalescência. Testes negativos após 12 semanas da exposição descartam a infecção.

Pode existir reação cruzada com outros vírus da mesma família, principalmente os Flavivírus.

Testes moleculares – podem detectar a presença do vírus em amostras de sangue e urina, através da Reação em Cadeia da Polimerase (PCR).

Em amostras de sangue, são capazes de detectar o vírus nos 7 primeiros dias de infecção e até 4 dias após.

Em amostras de urina, o vírus pode ser detectado até 15 dias após a infecção.

Um teste molecular negativo não exclui a infecção, sendo necessário realizar a pesquisa de anticorpos, no caso de suspeita clínica.

Recentemente, a ANVISA aprovou o registro de cinco diferentes produtos para detecção de infecção pelos três vírus, Zika, Dengue e Chikungunya.

O ideal seria testar o paciente sintomático para os três vírus, fazendo um diagnóstico confiável e descartando ou confirmando a infecção por mais de um tipo de vírus.

Para ler o documento na íntegra, clique aqui.

Saiba mais sobre o Zika vírus

O Zika vírus (ZIKV) pertence a família Flaviviridae, de genoma composto por (+)ssRNA. Seu primeiro isolamento foi em 1947, em um macaco Rhesus na floresta Zika, Uganda. Circula ativamente no leste e oeste africano e sudoeste asiático.

Assim como o vírus da Dengue e o vírus Chikungunya, a transmissão do ZIKV se dá pelos mosquitos do gênero Aedes, sendo que ele já foi isolado em A. africanus, A. luteocephaluse e A. aegypti.

A infecção causada pelo ZIKV (febre Zika) cursa como uma síndrome caracterizada por febre, cefaleia, artralgia, mialgia, mal-estar, anorexia, erupções cutâneas, astenia, dor retro-ocular, edema, linfadenopatia e diarreia. Geralmente os sintomas são moderados, e duram de 2 a 7 dias.

Com informações de Sociedade Brasileira de Patologia Clínica/Medicina Laboratorial

Ivan Konstantinov da companhia Visual Science, juntamente com seus colegas, usaram seus conhecimentos sobre vírus relacionados, como o vírus da dengue, vírus da febre amarela e vírus do Oeste do Nilo, para criar uma imagem do que seria a estrutura do vírus Zika.

Para a elaboração desse modelo 3D foram utilizados como referências vários artigos publicados em periódicos importantes. O modelo do vírus Zika faz parte de um projeto educacional não comercial, chamado Parque Viral (em inglês, Viral Park), e inclui modelos do HIV, vírus influenza, adenovírus, vírus Ebola e HPV.

Veja então como seria o vírus Zika:

Vírus Zika

Estrutura

Os vírions (partícula viral fora do hospedeiro) dos flavivírus têm diâmetro de 50 nm, aproximadamente 2,5 vezes menores que o HIV ou o vírus influenza.

Existem três tipos de proteínas: E, M e C. As proteínas de superfície, E e M, formam um envelope esférico e permitem com que o vírus entre na célula durante a infecção. A maior proteína de superfície E é glicosilada.

O genoma do vírus é composto por RNA de fita simples (sentido positivo), ligado às proteínas do capsídeo. Sugere-se que o capsídeo dos flavivírus não seja organizado e não forme estruturas regulares. O RNA tem a tendência de se concentrar próximo a dímeros de proteína C.

Além dessas proteínas estruturais, o genoma dos flavivírus codifica sete proteínas que não estão presentes na partícula viral. São essas proteínas que coordenam a replicação viral e inibem a resposta de sistema imune.

A scientifically accurate model of the Zika virus

No corpo humano, o vírus Zika infecta as células dendríticas e então é levado aos órgãos e tecidos pelo fluxo sanguíneo. O receptor de membrana para o vírus Zika ainda não foi identificado, mas pesquisadores destacam a proteína de membrana AXL como um dos possíveis candidatos.

O vírus Zika (ZIKV) pertence a família Flaviviridae, de genoma composto por (+)ssRNA. Seu primeiro isolamento foi em 1947, em um macaco Rhesus na floresta Zika, Uganda. Circula ativamente no leste e oeste africano e sudoeste asiático.

Manifestações clínicas

Diagnóstico

Tratamento

Um artigo publicado na revista Cancer Research, liderado por pesquisadores da Universidade de São Paulo, revelou um lado ainda não conhecido do Zika Vírus: terapêutico.

O Zika Vírus, em 2015, ficou extremamente conhecido ao ser relacionado como causador da Microcefalia em bebês de mães que foram infectadas durante a gestação.

A pesquisa mostrou que o vírus é capaz de infectar e destruir células cancerígenas de tumores embrionários no Sistema Nervoso Central.

O estudo, realizado em animais, injetou o vírus purificado em tumores cerebrais de embriões humanos em camundongos com o sistema imunológico reduzido.

Para saber mais, confira nosso episódio #71:

http://biomedcast.com/71-2

Ainda na graduação, as alunas de biomedicina Cecília Benazzato (FMU) e Nathalia Almeida (UNIFESP), participam do grupo de pesquisa da Universidade de São Paulo (USP), que por meio de experimentos com camundongos, mostrou que o Zika Vírus é capaz de atravessar a barreira placentária, infectar e matar as células que dariam origem ao cérebro dos animais em gestação.

O artigo publicado na Nature contou com a colaboração do coordenador da Rede Zika, Paolo Zanotto (ICB-USP), e de Alysson Muotri, pesquisador na Universidade da Califórnia em San Diego, nos Estados Unidos. As análises foram conduzidas principalmente pelas pós-graduandas da FMVZ-USP Fernanda Cuogola, Isabella Fernandes e Fabiele Russo.

As estudantes ficaram responsáveis pela manutenção das neurosferas e dos minicérebros (organoides cerebrais) usados na pesquisa. Elas também cuidaram da confecção das figuras do artigo científico. Outra parte que ficou por conta das meninas foi a extração de RNA de células nervosas.

Em entrevista ao blog Cadê a Cura, Nathalia afirma: “Eu ia dormir e fica pensando em RNA, Trizol [reagente usado para extrair RNA]…”. “Aluno de Iniciação Científica não tem muita experiência… Eu fiz o que pude, dei minha vida. Tinha uma doutoranda responsável, a gente fazia de tudo para ajudar: extraia [RNA], quantificava, limpava o laboratório, acompanhava…”.

Dados de testes in vitro sugerem ainda que a linhagem brasileira do vírus é mais agressiva do que a linhagem africana, que originalmente infectava macacos.

Para complementar os ensaios in vivo, foram realizados nos diversos tecidos dos camundongos recém-nascidos testes moleculares do tipo de PCR (reação em cadeia da polimerase) em tempo real, capazes de detectar o RNA viral durante a fase aguda da infecção.

Nos testes in vitro foram usados três diferentes modelos desenvolvidos a partir de células humanas: culturas bidimensionais (em placa de vidro) de neurônios e de células progenitoras neurais (um tipo de célula-tronco capaz de se diferenciar em neurônios e células da glia); culturas tridimensionais de células progenitoras neurais (cultivadas em suspensão para formar as chamadas neuroesferas); e organoides cerebrais ou minicérebros (estruturas tridimensionais milimétricas criadas em laboratório a partir de células-tronco pluripotentes induzidas e capazes de mimetizar o cérebro de fetos no primeiro trimestre de gestação).

Cugola, FR et al. The Brazilian Zika virus strain causes birth defects in experimental models. Nature, 2016 (link).

Fontes: Agência Fapesp e Blog Cadê a Cura

Uma das recentes descobertas sobre o Zika vírus é que seu material genético pode ser encontrado e persistir no sêmen humano por até seis meses após a infecção, causando preocupação nos casais que planejavam ter filhos.

Uma metanálise, publicada no periódico Emerging Infectious Diseases, encontrou que outros 26 vírus também podem estar presentes no sêmen humano. Entre eles estão o vírus Ebola, o HIV, o vírus da hepatite B e os herpes vírus humanos.

Após revisar mais de 3800 publicações científicas, os autores encontraram evidência de que pelo menos 11 desses vírus podem permanecer viáveis nos testículos, incluindo aqueles que causam gripe, dengue e síndrome respiratória aguda grave.

Apesar de nem todos os 27 vírus serem transmitidos por contato direto, eles podem causar outros problemas sérios, como a redução da fertilidade ou o aumento do risco de disseminação de uma doença sexualmente transmissível. Alguns desses vírus podem inclusive causar mutações no DNA dos espermatozoides, que fertilizariam um óvulo e passariam a mutação induzida pelo agente viral para as gerações futuras.

Os vírus podem persistir no sistema reprodutor masculino mesmo se não forem capazes de se replicar. Isso seria explicado pelo fato de que os testículos são imunologicamente privilegiados, visto que a resposta imune é restrita nesse local para permitir a sobrevivência dos espermatozoides, que são imunogênicos.

Agora, os autores sugerem que mais pesquisas sejam feitas para entender como e se esses vírus podem ser transmitidos pela via sexual e quais deles realmente permanecem viáveis no sêmen, por quanto tempo e em quais concentrações.

Salam AP, Horby PW. The breadth of viruses in human semen. Emerg Infect Dis, 2017.
https://doi.org/10.3201/eid2311.171049

A Organização Mundial de Saúde (OMS) convocou um grupo de cientistas e especialistas em saúde pública para listar de cinco a dez doenças emergentes que devem ser priorizadas, devido a grande chance de epidemias num futuro próximo, e que ainda não existe medicamento específico para controle. A atenção voltada para essas doenças irá ajudar na pesquisa e desenvolvimento (P&D) de ferramentas que poderão ser utilizadas no combate e controle de possíveis futuras epidemias.

A lista inicial contém as seguintes doenças:

1. Febre hemorrágica da Criméia (do Congo);
2. Doença do vírus Ebola;
3. Febre hemorrágica de Marburg;
4. Febre de Lassa;
5. Síndrome Respiratória do Oriente Médio (MERS);
6. Síndrome Respiratória Aguda Grave (SARS);
7. Infecção pelo vírus Nipah;
8. Febre do Vale do Rift.

Essa lista inicial será revisada anualmente ou quando uma nova doença venha a aparecer.

A partir dessa listagem será possível iniciar ou melhorar o processo de P&D para desenvolver métodos de diagnóstico, vacinas e terapias para essas doenças.

Três ouras doenças foram classificadas como “sérias”, demandando ação da OMS para promover a P&D o mais rápido possível:

• Infecção pelo vírus Zika;
• Infecção pelo vírus Chikungunya;
• Síndrome febril grave com trombocitopenia.

Outras doenças potencialmente causadoras de epidemias, como dengue, HIV/AIDS, tuberculose e malária, não foram incluídas na lista devido a uma rede de pesquisa e controle já estabelecida.

Como podemos perceber os vírus estão à solta! E o Brasil está sofrendo com grandes epidemias virais, como a da Zika, dengue e Chikungunya. Grande esforço deve ser feito para que essas infecções sejam controladas, vacinas sejam produzidas e medicamentos desenvolvidos.

Com informações da OMS

Febre, dor de cabeça, dor nas articulações, dores no corpo, manchas vermelhas na pele… Poderíamos estar falando de Dengue, Zika, Chikungunya, ou qualquer doença causada por um arbovírus.

Desta vez, o agente etiológico tem um nome ainda pouco popular, Vírus Mayaro. Neste episódio, fizemos uma breve introdução sobre a doença e o “novo” vírus, além de discutir alguns conceitos e panoramas desta nova doença que está surgindo em regiões rurais do centro-oeste e norte do nosso país.

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Atualmente, a infecção pelo vírus da Dengue (DENV) é a doença viral transmitida por mosquito mais importante do mundo.

Assim como outros flavivírus o genoma do DENV é composto por uma fita simples de RNA. Porém, ao contrário dos outros flavivírus, ele possui quatro subtipos, denominados DENV1, DENV2, DENV3 e DENV4, que são geneticamente similares mas antigenicamente distintos.

A infecção por qualquer um dos quatro sorotipos de DENV pode resultar em uma gama de manifestações clínicas, indo desde uma febre branda até um quadro hemorrágico, com a maioria dos casos (70-80%) sendo assintomáticos. Depois da infecção primária, o indivíduo fica imunologicamente protegido contra aquele sorotipo em particular.

Diagnóstico clínico

O diagnóstico clínico da dengue é desafiador, dependendo principalmente de qual estágio da infecção a pessoa encontra-se. Dependendo da região geográfica, podem existir outros micro-organismos que causam doenças com sintomas similares ao da dengue.

Nos estágios iniciais, a doença apresenta-se como uma febre branda, parecida com a da gripe, e sintomas similares a outras doenças como influenza, Zika, Chikungunya, febre amarela e malária.

Devido a diversidade de sintomas, é essencial o uso das técnicas laboratoriais para um diagnóstico preciso.

Classificação

Em 2009, um grupo coordenado pela Organização Mundial de Saúde (OMS) elaboraram uma série de diretrizes para o manejo clínico da dengue.

Além disso, eles modificaram a classificação da doença, passando de dengue febril, dengue febril com hemorragia e síndrome do choque da dengue para dengue (com ou sem sinais de alarme) e dengue grave.

Diagnóstico laboratorial

Para o diagnóstico laboratorial, diversos biomarcadores são utilizados, como a detecção do vírus (isolamento viral), a pesquisa de produtos virais (antígenos) ou a resposta imunológica do hospedeiro (imunoglobulinas). O aparecimento e duração desse biomarcadores dependem do estágio da infecção.

Isolamento viral

Esse método de diagnóstico tem sido o mais tradicional na detecção do DENV, mas está sendo gradualmente substituído pela reação de transcrição reversa, seguida da reação da polimerase em cadeia (RT-PCR) e também pelo ensaio imunoenzimático (ELISA) para captura do antígeno NS1.

Para o isolamento do DENV, amostras dos pacientes são cultivadas em células de mosquitos ou mamíferos, ou ainda em mosquitos vivos. As amostras coletadas até cinco dias após o início da infecção apresentam os melhores resultados.

O problema dessa metodologia é a demora, já que o resultado do isolamento pode demorar de dias até semanas para ficar pronto.

RT-PCR

Métodos moleculares têm sido usados com sucesso no diagnóstico da infecção pelo DENV. O ponto positivo é a rapidez no resultado, que pode ficar pronto no mesmo dia ou no dia seguinte.

Essa metodologia pode detectar o RNA viral desde o início da infecção, é sensível, específica, rápida, menos complicada e mais barata do que o isolamento viral.

Apesar dessas vantagens, a utilização da RT-PCR nem sempre é uma opção em locais remotos onde a dengue é endêmica, já que requer equipamentos especializados e profissionais treinados para realizar as análises.

Além disso, apesar de haver kits comerciais disponíveis, a maioria dos métodos de RT-PCR são desenvolvidos in house e não têm uma padronização entre os centros de diagnóstico.

Captura do antígeno NS1

A proteína viral NS1 é o alvo ideal, pois é secretada pelas células infectadas e pode ser detectada desde o início dos sintomas até nove dias ou mais, pelo menos na infecção primária.

A NS1 pode ser detectada no mesmo momento do RNA viral e antes do aparecimento dos anticorpos.

A primeira abordagem para a captura do antígeno NS1 por ELISA foi descrito em 2000. Após, foram desenvolvidos kits comerciais para captura de NS1 por ELISA e por imunocromatografia (teste rápido).

Isso revolucionou o diagnóstico de dengue e forneceu um exame simples que requer pouca tecnologia para ser executado, e agora é o novo padrão ouro no diagnóstico da infecção.

Sorologia

Existem inúmeras metodologias para a detecção das imunoglobulinas anti-DENV, incluindo inibição da hemaglutinação, imunofluorescência indireta, fixação do complemento, western blotting, ELISA entre outras.

IgM pode aparecer entre três e cinco dias na infecção primária, com pico em algumas semanas após a recuperação, permanecendo detectável por alguns meses.

IgG geralmente não aparece durante a fase aguda da infecção primária. Porém, durante a infecção secundária, há um rápido aumento de IgG em resposta aos epítopos de múltiplas proteínas compartilhados entre o primeiro e segundo sorotipo, com seu aparecimento após três dias do início da infecção.

A detecção do DENV por sorologia em locais onde existem mais de um flavivírus (Zika, Chikungunya, febre amarela) é complicado, devido a epítopos da proteína E dos flavivírus e, consequentemente, a ocorrência de reação cruzada dos anticorpos. Isso pode levar a resultados falso-positivos.

Combinação

Dessa forma, a melhor forma de diagnóstico da dengue é a combinação de detecção do vírus e dos produtos virais, juntamente com a sorologia. Além disso, o monitoramento clínico continua sendo importante, identificando os pacientes com risco de progressão para a dengue grave.

Fonte: Muller, D. A. et al. Clinical and Laboratory Diagnosis of Dengue Virus Infection. J Infect Dis, 2017.

Quem nunca desejou achar um site com esse título? Quando chega a tão temida hora de fazer o Trabalho de Conclusão de Curso (TCC) os estudantes chegam à aquela pergunta crucial: “– Qual será o meu tema?” Isso também aconteceu comigo. Antes de chegar ao tema definitivo, mudei três vezes.

Estudo desenvolvido por professor da UFMG, o biomédico Alexander Birbrair, com a colaboração de pesquisadores norte-americanos, sugere uma série de estratégias que, associadas, podem se constituir em promessa terapêutica para eliminar o glioblastoma, tumor cerebral agressivo, que dá ao paciente baixo prognóstico de sobrevivência.

Descrito em artigo publicado neste mês na revista Stem Cells Translational Medicine, o trabalho mostra que é possível fazer as células-tronco neurais derivadas do músculo esquelético chegarem a todas as áreas afetadas – tumor central e seus satélites –, levando vírus modificado por engenharia genética, que produz, de forma contínua, uma droga potente e de eficácia comprovada contra esse tipo de câncer.

"O grande achado da pesquisa foi a descoberta de que uma célula-tronco neural derivada do pericito muscular, célula dos vasos sanguíneos do músculo esquelético, tem atração natural por substâncias produzidas pelo tumor", esclarece Birbrair, do Departamento de Patologia do Instituto de Ciências Biológicas (ICB), primeiro autor do artigo.

O vírus modificado é o HIV, que, em estado normal, causaria a AIDS e, quando modificado, perde essa capacidade.

Incluído nessa célula, ele chega às áreas cancerosas, nas quais descarrega o medicamento. Birbrair explica que a barreira hematoencefálica, que protege o cérebro e o isola do resto do organismo, torna-se fator negativo quando se trata de fazer chegar ao local, por via sanguínea, medicamentos que combatam células tumorais. Daí a necessidade de se desenvolver outras estratégias para atingir o tumor.

O artigo recém-publicado demonstra como as células-tronco neurais, em inglês Neural-like stem cells (NLSC), movem-se em direção às regiões afetadas pelo tumor, tanto na área central quanto em suas metástases.

Com o auxílio de proteínas com cores fluorescentes, foi possível acompanhar esse movimento.

"Descobrimos que essas células in vitro tinham afinidade com as substâncias tumorais, mas era preciso observar se no animal elas migrariam para o local correto. Em camundongos, injetamos, em um dos lados do cérebro, as células do câncer, com fluorescência vermelha, e, no outro lado, as células-tronco, em verde. E observamos que estas migravam, procurando aquelas, até mesmo nas áreas com metástase", descreve.

"Toda a pesquisa foi feita em camundongos. Para levar adiante as próximas etapas, incluindo testes pré-clínicos para pacientes com câncer de cérebro, grandes investimentos em pesquisa são necessários e muito bem-vindos", enfatiza Alexander Birbrair.

Ele também pondera que o fato de usar um vírus normalmente patogênico para uma finalidade benéfica abre possibilidades em diversas áreas: "Como tem tropismo para o sistema nervoso central, o vírus da Zika poderia, no futuro, ser usado, por exemplo, para levar drogas a certas regiões do cérebro afetadas por doenças neurodegenerativas."

Artigo: Novel peripherally derived neural-like stem cells as therapeutic carriers for treating glioblastomas <link>

Fonte: Boletim UFMG

Manifestações clínicas

Diagnóstico

Tratamento

O Jornal da Biomedicina foi idealizado por alunos e professores do curso de graduação em Biomedicina do Instituto de Ciências Biomédicas da Universidade Federal de Uberlândia (UFU), o ICBIM. A ideia é tornar assuntos da área biomédica acessíveis tanto aos alunos da universidade, quanto a população em geral.

A grande curiosidade e preocupação geradas por acontecimentos no nosso dia a dia levantam questões que serão discutidas nas edições do jornal. Como exemplo, a atual situação das epidemias resultantes das infecções pelo vírus Zika e H1N1 tem preocupado toda a população no Brasil e no mundo, e mobilizado para uma maior conscientização e combate a tais doenças.

No ano em que se completa 10 anos de criação do curso de Biomedicina, houve a necessidade de criar algo que levasse o nosso curso a um próximo nível de qualidade e também tornasse de conhecimento da população o que fazemos e como fazemos.

E então, a partir da propriedade intelectual de alunos do curso de Biomedicina da UFU criou-se o Jornal da Biomedicina com a intenção de levar tanto à população acadêmica quanto a população além dos muros da universidade abordagens sobre assuntos atuais e que geralmente levam a muitos questionamentos e algumas vezes são respondidos de forma equivocada ou não são passadas da forma correta.

Além de abordagens mais comuns, há o interesse em tentar mostrar avanços nos resultados de pesquisa, projetos de pesquisa em andamento, projetos de ensino, projetos de extensão e depoimentos sobre assuntos atuais de caráter acadêmico, científico e/ou social que contribuam com o fortalecimento da biomedicina.

Acesse: jornaldabiomedicina.wixsite.com/jbmd
Facebook: facebook.com/jornaldabiomedicina

Vem aí o  III Congresso Baiano de Biomedicina & IV Congresso Baiano de Análises Clínicas.

Será nos dias 11, 12 e 13 de novembro de 2016, no Olimpo (anexo da Unidade de Ensino Superior de Feira de Santana-UNEF) localizado em Feira de Santana - Bahia.

Os valores do 1º lote de inscrições é de 70 reais para estudantes e 120 para profissionais, sendo que as inscrições nos minicursos são opcionais. O valor do minicurso é 30 reais.

Haverá apresentações de trabalhos científicos, além de mesas redondas e palestras com grandes nomes da saúde como professor Gúbio Soares, o descobridor do Zika vírus no Brasil e Alexander Birbair, o primeiro biomédico capa da revista Science.

Facebook: III CBBM & IV CBAC

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