Quando um soro/plasma de um paciente que contenha anticorpos incompletos for incubado, em uma temperatura específica, com hemácias que contenham o antígeno correspondente, os anticorpos fixam-se à superfície destas hemácias, sensibilizando-as. 

As hemácias sensibilizadas são reveladas pelo soro de Coombs (soro antiglobulina humana).

Através do teste de Coombs Indireto, pesquisa-se a presença de anticorpos incompletos ou imunes (irregulares) presentes na amostra do paciente.

Na hemoterapia (bancos de sangue e agências transfusionais) essa técnica é chamada de Pesquisa de Anticorpos Irregulares (PAI).

• Leia também: Teste da Antiglobulina Direto (Coombs Direto)

Técnica em tubo

1. Preparar uma suspensão salina a 5% com hemácias conhecidas quanto ao antígeno e cujo anticorpo correspondente se deseja detectar (o mais comum é a detecção de anticorpos anti-Rh positivo, anti-D);
   a) As hemácias devem ser compatíveis com o soro quanto ao sistema ABO;
   b) Geralmente, empregam-se hemácias do grupo O, RhD positivo;
2. Colocar duas gotas (~100 µL) da suspensão em um tubo de ensaio e lavar três vezes com solução salina;
3. Adicionar duas gotas do soro (~100 µL) do paciente a ser testado;
4. Misturar e incubar a 37ºC, durante 30 a 45 minutos;
5. Em seguida, lavar as hemácias três vezes com solução salina e adicionar o soro antiglobulina humana (~100 µL);
6. Agitar e centrifugar a 1.000 rpm. por 15 segundos;
7. Proceder a leitura.

Técnica em gel

1. Pipete 50 µL da suspensão de hemácias comerciais I em um no microtubo do cartão específico para Coombs (consulte a marca do kit);
2. Pipete 50 µL da suspensão de hemácias comerciais II em outro microtubo do cartão específico para Coombs (consulte a marca do kit);
3. Pipete 25 µL do soro do paciente nos microtubos contendo as hemácias comerciais;
4. Coloque o cartão na incubadora a 37ºC por 30 minutos;
5. Após, centrifugue de acordo com as recomendações da marca do kit;
6. Realize a leitura.

Técnica em cartão de gel BioRad

Interpretação

Presença de aglutinação: Teste de Coombs Indireto Positivo
Ausência de aglutinação: Teste de Coombs Indireto Negativo

Observações

1. Utilize amostras-controle positivas e/ou negativas.
2. Nos casos positivos, é necessário fazer a titulação do soro. O título será dado pela última diluição com resultado positivo.
3. A pesquisa de anticorpos poderá ser feita em meio salino (sem emprego do soro de Coombs); em meio albuminoso (albumina) ou ainda utilizando-se hemácias previamente tratadas por enzimas (tripsina, etc).

Precauções

Tanto para as determinações do Fator RhD em tubo, provas de Coombs Direta e Indireta, é necessário que se tome uma série de cuidados.

• Não colocar hemácias em excesso na suspensão, pois poderá haver formação de um “botão” muito grande, levando eventualmente, a um resultado falsamente positivo.
• O tempo de incubação não deverá ser inferior a 30 minutos.
• A centrifugação final não deve exceder ao tempo e a velocidade preconizados, pois o “botão de hemácias” poderá aderir ao fundo do tubo, dificultando a leitura e podendo provocar um resultado falsamente positivo.

Referências

Girello AL, Kuhn TIBB. Fundamentos da imuno-hematologia eritrocitária. 3ª Ed.